文章插图
常用的分离方法有细胞接种和乳鼠接种 。
1998年人们开始用人肺系细胞(MRC-5)分离Cox A16等毒株,其敏感性好且接种病毒后出现细胞病变较快 。人源细胞如W1-38、横纹肌瘤细胞(RD)也都可用于病毒分离 。RD细胞支持大多数柯萨奇A组病毒复制,但一般要经过2次以上传代才出现明显病变,若在使用RD 细胞分离的同时再增加1株L20B或Hep-2细胞,可提高肠道病毒的分离率 。为提高细胞对肠道病毒的敏感性,还可在细胞接种前用50μg/ml的5-碘脱氧尿嘧啶处理3天 。
对一些不能在细胞上生长的病毒,可用乳鼠接种分离病毒 。埃可病毒一般不引起乳鼠发病,多由脑脊液分离,粪便中不易检出 。
肠道病毒型特异性鉴定主要靠血清中和实验,LMB组合血清可大大简化鉴定过程,但是有些毒株的中和作用不稳定,仍需由单价血清来鉴定,另一要注意的是病毒颗粒的集聚会影响中和效果,如EV 71的中和实验就需要使用单个分散的病毒 。
近年来,PCR 技术已成为诊断肠道病毒感染最常用的一种方法 。PCR测序技术则可用于肠道病毒分型 。
手足口病抗体检测的最常用方法目前仍是中和实验,该方法精确且具有型特异性 。
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