检验男人不孕的实验室方法

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许多不孕不育症的原因都是在男方的身上。而因为精子的问题造成不孕不育是其中常见的病因。抗精子抗体就是精子的一个“毒物” 。他让精子的质量变差，导致精子不能和卵子结合，孕育出生命。
抗精子抗体与精子结合后，在补体参与下，可导致精子制动和死亡，利用台盼蓝或伊红Y 等染料使死精子染色，间接验证血清或分泌液中是否有制动精子的抗体存在。
(一) 台盼蓝染色法
【准备】
(1) 待检血清的分离和灭活补体。
(2) AB血型人血清(补体)制备。
(3) 2%台盼蓝液配制(用蒸馏水) 。
【检验男人不孕的实验室方法】 (4) 台盼蓝-生理盐水溶液配制：取适量生理盐水，加等体积2%台盼蓝水溶液，混匀即可。
(5) 配制0.01 mol/L，pH 7.4 PBS溶液。
【方法】
(1) 取正常新鲜精液[精子浓度为(40～ 100)×106/mL]用pH7.4 PBS作1∶10稀释，以500r/min 30min离心洗涤一次，弃去上清，沉渣用PBS调整精子浓度为100×106/mL 的精子悬液。
(2) 在小试管内加入1滴待检血清，1滴精子悬液和 2滴补体血清。置37℃ 孵育，并于30min、60min分别追加2滴补体血清，直至90min后加入 1滴台盼蓝生理盐水溶液，继续孵育 60min，取出小试管，以500r/min，30min离心，弃去上清，将沉渣涂片，待干燥后镜下观察。以阴性血清作对照组，以同样条件和方法处理
(3) 计数：对照组：记录数至100个无染色精子(活精子)时所需的总精子数(含100个无染色精子加一定数量染色的死精子) 。实验组：记录对照组相应的总精子数，把其中所含的无染色精子(活精子)数作X 。将100-X所得的数目，即为被检血致死的精子数，这个数目称为精子毒性指数(STI) 。
【判断】
STI>25时，P≤0.01，判为阳性。STI在 15～ 20之间，判为可疑。STI<15时，判为阴性。本法所得阳性率与精子制动试验的阳性率较为一致。
(二) 伊红Y染色法
【准备】
(1) 用蒸馏水配制4% 伊红 Y 染液。
(2) 配制0.01mol/L，pH7.4 PBS溶液。
【方法】
(1) 取正常新鲜精液(精子浓度宜大于：60×106/mL)，用pH 7.4的 PBS洗涤 3次，调整精子浓度为10×107/mL 。
(2) 取精子悬液16μL，移置载玻板的漆孔内，分别设2个测定和对照孔，另取待检血清20μL，补体血清4μL 加入测定孔内，对照孔只加待测血清不加补体，充分混匀。
(3) 把玻板移入湿盒内，在37℃孵育30min，每孔加4%伊红Y 4μL，加上盖玻片使其作用 2min，进行镜检。
【判断】
由于活精子不着色，死精子着染为红色，计算200个精子中，死精子所占的百分数，减去对照组死精子的百分数，即为抗体杀灭精子的百分率。以杀灭精子≥10% 以上者为阳性。