[2]4、血低密度胆固醇(LDL)匀相测定法基本原理有以下几类:增溶法(Sol法)、表面活性剂法(SUR法)、保护法(PRO法)β-定量法本法为超离心结合选择性沉淀法 。超离心、选择性沉淀二步骤与HDL-C参考方法相同,只是,Chol测定时除测定沉淀后上层的HDL-C外,还同时测定超离心后的下层液(含HDL和LDL)胆固醇 。PVS沉淀法原理:血清中聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚(PVS)选择性地沉淀LDL,离心后上层液中含HDL,VLDL和CM,用胆固醇测定酶试剂分别测定上层液和血清总胆固醇含量,二者之差即LDL-C含量 。
Friedawald公式计算法Friedawald原公式按旧单位mg/dl计算,假设血清中VLDL-C为血清TG量的1/5量计(以重量计)则:LDL-C=TC-HDL-C-TG/5 。按法定计量单位mmol/L计算,则应为LDL-C= TC-HDL-C-TG/2.2 。
3.血脂测定方法仪器
1.血清TC测定:化学抽提法—ALBK法为目前国际上通用的参考方法 。卫生部北京老年医学研究所生化室建立的高效液相色谱(HPLC)法也推荐作为我国TC测定的参考方法 。
建议酶法[如胆固醇氧化酶- 过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(CHOD-PAP法)](以胆固醇酯酶水解血清中的胆固醇酯,同时以胆固醇氧化酶将胆固醇氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢,终点产物的测定应用最广的是Trinder显色反应系统,试剂含过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚 。)作为临床实验室测定血清TC的常规方法 。
2.血清TG测定:目前尚无公认的TG测定的参考方法,二氯甲烷-硅酸-变色酸法是美国疾病预防与控制中心(CDC)测定TG采用的参考方法 。卫生部北京老年医学研究所建立的HPLC 测定总甘油和游离甘油的方法拟推荐为我国TG测定的参考方法 。
建议酶法[如甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(GPO-PAP 法)]作为临床实验室测定血清TG的常规方法 。
一般临床实验室可采用一步GPO-PAP法,有条件的实验室(如三级以上医院)应考虑开展游离甘油的测定或采用两步酶法 。
3.血清HDL-C测定:超速离心结合ALBK法为HDL-C测定的参考方法 。硫酸葡聚糖-镁沉淀法(DS法)结合ALBK法被美国胆固醇参考方法实验室网络(CRMLN)作为指定的比较方法(DCM法) 。
1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐的磷钨酸镁沉淀法(PTA-Mg2+法),但此法的主要缺点是标本需预先离心处理,结果易受高TG影响 。
建议匀相测定法作为临床实验室测定血清HDL-C的常规方法 。可供选择的方法主要有:清除法(Clearance method),PEG修饰酶法(PEGME法),包括反应促进剂-过氧化物酶清除法(SPD法)和过氧化氢酶清除法(CAT法),选择性抑制法(PPD法),免疫分离法(IS法)包括PEG/抗体包裹法(IRC法)和抗体免疫分离法(AB法) 。
4.血清LDL-C测定:超速离心结合ALBK法为LDL-C测定的参考方法 。
1995年中华医学会检验学会曾在国内推荐聚乙烯硫酸沉淀法(PVS法)作为LDL-C测定的常规方法,但此法的主要缺点是标本需预先离心处理,结果易受高TG影响 。
建议匀相测定法作为临床实验室测定血清LDL-C的常规方法 。可供选择的方法主要有:表面活性剂清除法(SUR法),过氧化氢酶清除法(CAT法),杯芳烃法(CAL法),可溶性反应法(SOL法)和保护性试剂法(PRO法) 。
5.血清apoAI和apoB测定:目前尚无公认的血清apoAI和apoB测定的参考方法 。目前临床实验室测定血清apoAI、apoB含量的方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫浊度法[包括免疫散射比浊法(INA)和免疫透射比浊法(ITA)] 。
建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清apoAI、apoB的常规方法,首选ITA法,其次为INA法 。
6.血清Lp(a)测定:目前尚无公认的血清Lp(a)测定的参考方法 。目前临床实验室测定血清Lp(a)的方法主要有ELISA和免疫浊度法,其中以ITA法最为常用 。
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